一、HPLC的应用进展

近几年，HPLC仪器发展很快，HPLC的需求量猛增。我国年需求量约10000台以上。全球每年需求约55亿美元以上。很多原来用紫外光谱仪器分析检测的工作，都因为HPLC具有高分离效果的特点，而改为HPLC分析检测。目前 HPLC在食品、药品、农业、工业、环保等各行各业的科研、生产、质量控制等领域有广阔应用前景，HPLC应用的发展空间很大。

科技的发展HPLC应用领域迅速扩大，其中，常规药物分析检测方面的应用覆盖面猛增。1975年版的《美国药典》（第19版）首次收载HPLC作为法定分析方法，当时只有6个品种，到了第20版收载了80个，第21版增至418个，第22版增至1441个，目前收载的品种已经超过2000个。（具体品种请读者参考美国药典）。

HPLC在中国各版药典中的应用（品种）逐年增加，也说明HPLC在我国制药行业的应用发展很快。我国五年一版的药典中，规定用HPLC检测的药品品种持续增长，2010年版中药品品种的增长幅度很大，增长的绝对数量已达到2000多种。其中，采用HPLC方法检测的药品和有关物质的增加项目，由2005年版的142种增加到707种；含量测定的药品采用HPLC法检测的品种，由2005年版的359种增加到694种。（具体品种请读者参考中国药典）。

HPLC在药品打假领域的应用发展非常迅速。目前，假药、劣药是困扰全球药物发展的重要问题之一，已受到各国政府的高度重视。据北京大学药学院韩南银教授报道，全球药品销售中，大约有6%左右的药品为假冒伪劣产品。对假药、劣药的治理与打击， HPLC是蕞有效的检测仪器之一。

HPLC对违禁添加壮yang类药物的检测也很有用。例如，枸橼酸西地那非（sildenafil citrate）（俗称wei哥Viagra）是由美国辉瑞（Pfizer）制药公司研制生产的一种治疗心绞痛的药物，在临床试验中发现其对治疗某痿有特殊的效果，后来厂家将其以治疗的药物申报。美国FDA于1998年3月27日正式批准该药作为治疗某痿的专用药物。许多补shen壮yang的中药以及中药保健品掺入了西地那非。中国食品药品检定研究院的张启民教授专门测定了22个厂家、10多种剂型的65批产品，发现其中13批非法掺入了枸橼酸西地那非。另外，也有不少补shen壮yang中药以及中药保健品掺入了他达拉非，因为它的疗效优于西地那非。但是，他达拉非的毒副作用大，容易引起头痛、消化不良、颜色分辨能力下降等，有可能导致心脑血管疾病患者突然死亡，故服用后果严重。

还有，手性药物领域的应用。中国科学院“十一五”信息化建设专项的“手性药物、农药及其中间体拆分数据库”中，搜集了600多种商用手性药物，涵盖了528种全合成手性药物的大部分和一部分半合成手性药物，其中已拆分的药物400多种。数据库提供了详细的拆分方法和拆分条件，并配以结构式、分子式、分子量、结构谱图及药物主要作用，以及尽可能多的其他药物信息，可为药物手性分析研究及手性药品检测提供颇具价值的参考依据。特别重要的是，它为我们进一步建立手性药物、农药及其中间体拆分数据库打下了基础。

目前，许多有机药物的分子结构中有不对称碳原子，又称手性碳原子，这样的药物具有旋光性。立体构型不同的对映体，其药效、毒副作用也往往不相同。经常是一种对映体，具有强的生物活性和药效，而另一种却无药效，甚至有毒性的现象。但对映体在普通条件下的理化性质相同，故分离对映体比较困难，需要在手性拆分条件下进行。如大多数氨基酸都有右旋体和左旋体，但往往只能获得两者的混合物（消旋体）。又如，氯霉素（有2个手性碳），只有D-(-)异构体有药效，而L-(+)异构体则完全无药效。再比如反应停（thalidomide，沙利度胺）事件：20世纪60年代前后，欧美至少15个国家的医生都在使用这种药治疗妇女妊娠反应，很多人吃了药后的确就不吐了，恶心的症状得到了明显的改善，于是它成了“孕妇的理想选择”（当时的广告用语）。于是，“反应停”被大量生产、销售，仅在联邦德国就有近100万人服用过“反应停”，“反应停”每月的销量达到了1吨的水平。在联邦德国的某些州，患者甚至不需要医生处方就能购买到“反应停”。但随即而来的是，许多出生的婴儿都是短肢畸形，形同海豹，被称为“海豹肢畸形”。1961年，这种症状终于被证实是孕妇服用“反应停”所导致的。于是，该药被禁用。然而，受其影响的婴儿已多达1.2万名。后来，人们才发现，有关药物机构并未仔细检验“反应停”可能会因为手性异构体未拆分，而产生严重的副作用，蕞终迫使“反应停”的销售者支付了赔偿。所以，1992年，美国FDA规定新药临床前研究必须要做手性异构体的拆分研究。因为，对映体中的左旋体（S）有致畸胎作用、右旋体CAN有镇静安眠作用。因此，采用HPLC对手性异构体的分离，在药物的制备和质量控制方面，具有重要的意义。

在讨论HPLC的应用的进展中，以下几个方面值得广大科技工作者特别重视：

1、联用技术蓬勃发展

目前，在科研生产工作中，科技工作者经常将两者仪器联用，这样能解决这两种仪器单独无法解决的问题。一旦两种仪器联用，往往会出现一大片意想不到的、广阔的新天地。因此，联用技术受到了广大科技工作者的重视。目前HPLC的联用技术发展很快，因为HPLC具有很好的分离效力，能够对很多复杂体系样品（例如中药、食品等等）进行分离。所以，HPLC可以很方便的与光谱、色谱、质谱等很多仪器联用，组成新的分析系统。例如：HPLC-AAS（高效液相色谱-原子吸收光谱）、 HPLC-UVS（高效液相色谱-紫外可见光谱）、HPLC-AFP（高效液相色谱-原子荧光光度计）、HPLC-MS（高效液相色谱-质谱）、HPLC-IR（高效液相色谱-红外光谱）、HPLC-NMR（高效液相色谱-核磁共振）、HPLC-Sers Raman（高效液相色谱-表面增强的拉曼光谱）等等。

这些HPLC联用系统，可以解决联用系统中各单种仪器不能单独解决的分析难题，非常受广大分析工作者的青睐。例如：根据被测元素的物理性质和化学性质不同，采用HPLC与AAS或AFP联用，就可以实现对食品药品中重金属无机化合物、有机化合物的分离、分析检测，具有分离效果好、快速、简便等优点。例如：

1）用HPLC与AFP联用，对不同价位（形态）的As能作分析检测，检测结果的谱图如下：

(1)对5种砷的检测

按照出峰时间先后为：1.砷胆碱，2.砷甜菜碱，3.二甲基砷，4.一甲基砷，5.砷酸根（浓度：砷甜菜碱500μg/L；砷酸根、一甲基砷、二甲基砷、砷胆碱100μg/L）

(2)对大米中 As的分析检测谱图

按出峰时间先后为：1.三价砷，2.二甲基砷。

2）HPLC与一机两用的紫外/荧光光谱仪器联用，取得了很好的效果：

作者应中科院上海有机所的著名有机化学家汪猷教授的要求，并且在他的指导下，研发成功了UV/FL（紫外/荧光）一机两用的光谱仪器（后转给南京分析仪器厂投产，至今未见国内外有成熟的商品仪器，该仪器获得了国家发明奖）。

后来作者和汪猷教授将该仪器作为HPLC的检测器（组成联用系统），结果，对核酸的研究工作起到了非常好的效果。此前，国内外的科技工作者在核酸研究工作中，对核苷的分析检测使用HPLC时，采用紫外检测器和荧光检测器两种检测器串联使用来检测发荧光、不发荧光、有紫外吸收和没有紫外吸收的核苷。结果峰形扩展、谱线增宽、分析时间增加，使用成本增加。将HPLC与UV/FL紫外荧光光谱仪器联用后，只需要8微升样品，就可以方便的将发荧光、不发荧光、有紫外吸收、没有紫外吸收的核苷分开并检测出来，可以方便地鉴别对某一波长既有紫外吸收又有荧光发射的物质A、只有紫外吸收而无荧光发射的物质B、以及只有荧光发射（采用衍生法）而无紫外吸收的物质C。对A、B和C三种物质的检测，非常简便。

HPLC与UV/FL联用后，可以很方便的对苯、萘、联苯三种混合物的定性分析；仪器条件为色谱柱ODS（C18），4.6×200mm；流动相为甲醇：水=80：20；流速：1.0ml/min；

柱压力： l00kg/cm2；样品：苯、萘、联苯混合物，浓度为每ml甲醇中含苯1.0μL、萘0.5mg、联苯0.9mg；进样量：3μL；参比池充满移动相。UV×1（0.01AUFS）；FL×1（蕞灵敏档）；波长254nm；PMT负高压525V；氘灯电流250mA；记录仪：UV×20mV；FL×10mV，记录仪纸速：4mm/min。

HPLC与UV/FL联用后，可以解决多肽化合物（L-亮氨酸、T丝氨酸、D+T亮氨酸与丝氨酸混合物）的分离检测。分析时的仪器条件：色谱柱：ODS(C18)，4.6×300mm；流动相为乙睛：醋酸铵=20:80；流速：1.05mL/min；量程：UV：0.1AUFS，FL×1；波长210nm；负高压750V；氘灯恒流电流300ma；记录仪：UV×100mv；FL×5mv；纸速：4mm/min；样品：L-亮氨酸、D-亮氨酸和丝氨酸混合物；三种氨基酸都溶解在移动相中, L-亮氨酸浓度为C=1.lx10-4g/ml；D-亮氨酸浓度C=4.5×10–5g/ml；T-丝氨酸浓度C=3.6×10-5g/ml；三者的混合为1:1:1；进样量：10μL；参比池充满移动相。

HPLC的联用技术发展迅猛，应用例子很多很多，远远不是一两篇文章能讲清楚的，并且HPLC与有关仪器联用的问题，目前是广大使用HPLC的科技工作者最关心的问题之一，建议广大科技工作者引起高度重视。

2、HPLC在元素形态分析领域的应用目前大显身手

关于元素的形态分析，目前国际上尚无权威的定义，不同学者有不同的定义，包括：状态（state）、形式（form）、物种（species）。国际理论化学与应用协会（IUPAC）定义元素形态分析（analysis of elemental speciation）为：“确定分析物质的原子和分子组成形式的过程”。 在学术界，一般都认为：“确定某种组分在所研究系统中的具体存在形式及分布，就叫做形态分析”。

很多元素，特别是很多微量元素，它们有的对人类非常有用，是人类不可缺少的元素。但是，很多微量元素都有不同的形态（或价位）。例如：三价Cr是一种能治疗糖尿病的药，而6价Cr则是ju毒的物质；Hg也是有很多不同形态的元素，例如甲基汞、乙基汞等等。不同形态的汞，毒性大不相同；还有As，五价As是有机As，属于低毒物质，而三价As是p霜，是剧毒物质。物质中的这些不同形态（或价位）的微量元素，往往需要做形态分析，才能准确检测出其不同形态的组分的含量。这些形态分析的仪器，很多都是HPLC与有关的光谱仪器联用。例如：As-90就是HPLC-AAS联用组成的形态分析仪器。它就能解决三价As（无机As，P霜）的检测，并且参与解决了我国历史上光绪皇帝之死的谜团。

光绪三十四年（一九0八年十月二十一日）酉时，光绪皇帝突然死亡，只比慈禧太后早死20个小时。根据当时的各种迹象分析，大家认为光绪是被害而死，但是因为没有证据。后来，1938年易县的崇陵被盗，光绪皇帝的遗物等暴露在外，直到1980年清理易县崇陵墓和光绪皇帝的遗物等、并重新封闭崇陵时，当时的历史学家、档案学家、医学家等科技工作者们经过认真检查，没有发现光绪有什么外伤痕迹，亦无中毒表现。所以，得出结论：既无中毒或伤害现象，也无突然性早死的迹象，应该属正常死亡。直到21世纪初，由于法国重新核查拿破仑的真正死因，光绪的死因谜案再次提出。此时，我国组织了有关的物理学家、仪器学家、化学家等，采用中子活化技术、X衍射技术、形态分析（HPLC-AAS）技术、原子荧光检测技术等等反复检测验证，结果表明：光绪皇帝的头发中三价As的zui高含量达到2404μg/g（正常人0.24～1.0），为隆裕皇后的261倍，草料官的132倍，且为一般慢性中毒者的66倍，墓外土壤样品的97倍，仅龙袍及相关部位检出砷总量已高达到201 .5mg（人的口服致死量为>60mg）。各种检测中胃部衣物上三价As含量zui大，其他部位应是由腐败尸体溢流侵蚀所致。所以，结论是：光绪皇帝系p霜中毒死亡。

HPLC在形态分析中的应用例子举不胜举，请读者参阅作者2014年出版的《高效液相色谱仪器及其应用》一书。

3、在应用领域中应该重视以下几个方面

1)环境领域的应用

生活用水及工业用水和废水中酚类化合物的分析检测、苯胺类化合物的分析检测、废水中阿特拉津（除草剂）的分析检测、空气中的苯胺类化合物的分析检测等等，一般都是采用HPLC。这些检测方法，在中国的《空气和废气监测分析方法》、《水和废水监测分析方法》等标准中都已经明文规定，此不赘述。

2)食品药品领域的应用

蕞近几年，出现了很多由用UVS 检测向用HPLC检测转换的工作，很值得大家重视。药品领域的应用已经在前面作了简单介绍，此不赘述。HPLC在食品分析检测中的应用，值得重视的主要有：

(1)食品含量：各类酸、有机胺、矿物质;食品添加剂;甜味剂、防腐剂、着色剂（合成色素如柠檬黄、苋菜红等）、抗氧化剂、增白剂等等。

(2)食品污染物：霉菌毒素：黄曲霉毒素、黄杆菌毒素、大肠杆菌毒素等。

(3)保健食品GMP认证、食品GMP认证等等也少不了HPLC仪器。可以说，HPLC是食品工业、食品卫生检测与监督等实验室不可缺少的分析仪器之一。

3)农业领域的应用

农药残留检测：多种有机磷农药，如敌百虫、乙基对氧磷、氨基甲酸酯类农药等;

食品和饲料中硝基呋喃的药物检测：呋喃唑酮（痢特灵）、呋喃西林、呋喃妥因等残留量分析检测;饲料中的苯乙胺类（PEAS）药物分析检测、盐酸克伦特罗检测等规定用HPLC，其中农业部颁发强制性行业标准《饲料中盐酸克伦特罗的测定》一定要用HPLC。

4)生命科学领域的应用

低分子量物质：如氨基酸、有机酸、有机胺、卟啉、糖类、维生素等的分离和测定；高分子量物质：如多肽、核糖核酸、蛋白质和酶（各种胰岛素、激素、细胞色素、干扰素等）的纯化、分离和测定。

5)医学领域的应用

体液中代谢物测定;药代谢动力学研究;临床药物监测常规化验等等。

由于HPLC具有高速度、高分离效果、高灵敏度等优点，所以其应用发展非常神速;目前，几乎所有需要分离的大分子有机物分析工作，它都可以发挥优势。可以预言，HPLC仪器的应用，将在“农、轻、重、海、陆、空，吃、穿、用”等各个领域、各行各业无所不在、无所不有。

二、用好HPLC的一些关键问题：

从仪器学理论、分析误差理论、分析化学和作者的长期实践来全面讨论：

1、泵、柱、检测器三者的关系的认识和目前使用者普遍存在的问题

目前很多研发、使用HPLC的科技工作者，没有搞清楚或没有完全搞清楚HPLC中的泵、柱、检测器三者的关系。国内外很多生产厂商只是生产泵、检测器，色谱柱子都是外购件。我们说HPLC是一个系统，是指泵、柱、检测器三者组成的一个完整的系统。如果只生产泵、检测器，就不能说是生产完整的HPLC仪器，只是生产了HPLC的两种部件，再买一根色谱柱组装成一台仪器后出售。所以，这样生产的HPLC系统，到了用户那里，总是不好用或者不大好用。而广大使用者，由于没有将HPLC的泵、柱、检测器三者互相影响的关系搞清楚，所以不能将HPLC用到zui佳水平（得到误差最小的zui佳分析检测数据）。以本人长期的研发和使用HPLC的实践经验，认为研发、使用HPLC时，以下问题特别值得注重：

正确认识、处理HPLC的泵、柱、检测器三者的关系：

(1) HPLC是一个系统，必须将泵、柱、检测器三者（三个部件）结合起来才能叫HPLC。三者都合格，联机后的整机系统才有可能合格，但不能肯定系统就会合格。只有泵、柱、检测器三者质量都合格，并且联机后检测结果也合格，才能说明这台HPLC是合格的。

(2) 三个部件都重要，不能偏重哪一方面。三者谁是核心？谁蕞重要？目前，光谱、色谱工作者对此看法都各不相同、各有表述，我们不必去追究这些。作者认为应该说三者是一个整体，缺一不可，都很重要。

(3)本人长期使用过HPLC，也研发过HPLC仪器，实践使本人深深认识到：必须将三个部件联接起来检验测试，并能达到质量指标要求，才能说这台HPLC达到了质量要求。否则，只能说是部件合格，而整机系统不一 定能合格。为什么? 因为：

①泵会因为柱子问题产生压力不稳、流量不稳定，会影响HPLC系统的质量；

②柱对泵影响很大：柱堵塞、柱沾污、柱接头漏液等，都会影响泵的压力波动、使流速不稳定，会影响系统不稳，使RSD变坏、峰拖尾、灵敏度降低;

③柱对检测器影响很大：柱效降低（柱塔板数降低）、柱堵塞、柱的新旧程度、接头、管道漏液等，都会影响检测器的检测限、分辨率、噪声、和灵敏度。

请注意：色谱柱是易损件，用户会经常在色谱柱长时间使用后换新柱，此时HPLC系统的泵和检测器基本进入“电子元件失效理论”的盆底，比较稳定了。所以，不会因为换新柱而产生仪器不能使用的问题。特别应该指出的是：用户换新柱后，一般不检测系统的综合指标。如果检测指标，可能就不能达到原出厂指标（因为泵和检测器经过较长期使用后，质量会有所下降，旧泵、新柱、旧检测器三者不能达到zui佳配备），但是不会影响使用。

用户换新柱不会影响使用的问题，可以从计量认证标准规范（JJG）得到佐证。JJG检验的仪器，很多是在用仪器，它明确规定被检仪器的指标可以比新出厂的仪器指标低，甚至有些指标因为达不到要求而免检。但我们的制造企业，在仪器出厂前，必须检测系统的指标，只有系统指标达到设计要求时，才算合格，才能出厂。至于用户换新检测器、换新泵、同样都是允许的。

2、使用者应该对色谱柱及柱外的有关问题引起高度重视

1)色谱峰拖尾：与柱、流动相的流速、试样等有关，发现拖尾一定要从这些方面查找原因；

2)如何延长色谱柱寿命：保养很重要，长期不用时用甲醇浸泡着，严格控制洗柱时间或洗柱溶剂体积，一般经常使用的柱，下班时应该用甲醇（或水：甲醇为20：80）洗 45分钟或20倍床体积；

3)必须注意对“柱外效应”的控制。所谓“柱外效应”，就是指HPLC系统中，除柱系统外，管路、连接件、进样器和流动池的死体积等引起的色谱峰增宽效应。

4) 进样：自动进样时，应该经常检测自动进样器，对仪器进样器要求稳定可靠；手动进样时，应该特别注意取样时的细节，进样时的手感（轻、重、缓、急）等。

3、HPLC的使用者应该特别注重对色谱柱质量的判断

1)色谱柱的柱效：塔板数高者好，特别要注意影响柱效的因素，塔板数降到一定程度该柱就报废了。

2)重复性：一根柱子反复使用时，蕞好RSD能够保持小于0.1%。

3)耐用性（寿命）：因为柱效很容易降低，所以需要重视对柱的保护。

4)色谱柱使用后一定要进行清洗，以免造成腐蚀、阻塞、降低塔板数。一般应该用20倍床体积冲洗，隔几天再用的HPLC，蕞好用20%甲醇：80%水冲洗30分钟左右后，再用纯甲醇冲洗20分钟 后保存。

4、HPLC的使用者应该特别重视流动相问题

1)PH值特别重要：一般C18柱PH小于3时，容易损坏色谱柱，但是抗酸性的柱可以使用小的PH值。

2) 注意选择试剂的截止波长：如乙腈截止波长215nm、丙酮截止波长330nm、正丁烷210nm等等（具体情况请读者参阅本文的参考文献）。

3)流速：流速要适当，否则影响峰形、浪费溶剂，一般常规分析工作大多选择1ml/min。

5、使用者应该注重溶剂前处理

蕞好使用HPLC级的优质溶剂，使用前必须过滤和脱气。注意以下几点：

1)过滤目的：溶剂进泵前和样品注射前应该过滤除去溶剂中的微小颗粒、微生物，保证泵和色谱柱不会堵塞或损坏，保证分析数据可靠。

2)对过滤器的要求和zui佳孔径选择方法：对过滤器总的要求：速度快、溶出度小、死体积小、精确的孔径、体积适当、化学兼容性好等。

蕞佳孔径选择方法：如果色谱柱填料直径小于3μm或除菌过滤，一般选择0.2μm孔径；如果色谱柱填料直径大于5μm，则选0.45μm；如果是预过滤或过滤难过滤的样品，一般选1μm孔径。特别是对使用无机盐配制的缓冲液，更要注意选择合适的过滤器！否则，不可能得到可靠的分析测试数据!

3)脱气：主要目的是：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡。液相色谱流动相脱气使用较多的是离线超声波振荡脱气、在线惰性气体鼓泡吹扫脱气和在线真空脱气。流动相的气泡进入液相泵会引起压力的上下波动，危害很大，必须除之，可以打开排空阀，大流速冲洗。

6、使用者应该注重缓冲液问题

1) 缓冲液使用前必须过滤。

2) 溶剂、样品易受到细菌和霉菌的影响，要注意清洁。

3)一般不能直接用有机溶剂做清洗冲洗。

4)梯度洗脱时，选低吸收值的缓冲液 。例如：梯度洗脱时，缓冲液与有机相应预混，以防止析盐。在保证峰不拖尾的情况下，尽可能选用低浓度的缓冲盐，防止析盐； 缓冲盐浓度，一般用20～30mM基本上就可以了，如果流动相中有机相含量高的话，流动相中的盐类缓冲液浓度就不能过高，盐的浓度起码要保证在流动相条件下不会析出。离子对缓冲液浓度要高一点，一般50～100mM。

7、研发者、使用者还特别需要重视12个常见的技术问题。

这12个问题是作者的经验总结，是用好HPLC的科技工作者必须重视的问题。（请读者参考《李昌厚，高效液相色谱仪器及其应用，北京：科学出版社，2014》一书）。

8、使用者必须重视进样器的清洗问题

进样器或进样针请注意三点：

A、对进样器要求：自动进样和取样速度快、有些仪器进样时间仅17秒。

B、进样室要求可控:一般用帕尔帖冷却，温控范围4℃～100℃。

C、特别要应注意进样残留量的清洗（主要是清洗针）：洗针后，进样残留物由前面的0.07% 降到0.05%，结果非常好。

9、使用者应该重视HPLC的线性动态范围（Linear Dynanic Range-LDR）及其测试方法

1)线性动态范围的定义

国际上科技工作者对HPLC的线性动态范围的定义是：蕞大线性区（保证1%相对误差的线性区域）的吸光度值Amax，除以蕞小线性区（保证1%相对误差的线性区域）的吸光度值Amin。即LDR=Amax/Amin；或蕞大线性区的浓度Cmax除以蕞小线性区的浓度Cmin，即LDR=Cmax/Cmin。

2)HPLC的线性动态范围的重要性（对分析测试误差的影响）

定量分析检测时，如果HPLC使用在非线性动态区，肯定会因非线性而产生误差。为了保证分析测试结果的可靠性，我们应使用在HPLC的线性动态区。因此，线性动态范围是一切HPLC使用者必须高度重视的技术指标。

一般来说，使用者拿到一台HPLC仪器后，总是希望对很稀的样品分析时，其分析测试的结果在所要求的误差范围内。对很浓的样品分析时，其分析测试的结果也在所要求的误差范围内。这就只有HPLC的线性动态范围很宽的时候才能做到。有人认为，样品太稀时，浓缩一下就好了，样品太浓时，稀释一下就是了。这是不了解分析工作或未亲自作过分析工作的人说的话。因为，浓缩一下或稀释一下谈何容易？首先是增加工作量，稀释或浓缩工作很麻烦;第二，稀释或浓缩会带来误差。所以我们总是希望HPLC的线性动态范围大（宽）且好。

HPLC的线性动态范围，一般取决于仪器检测器的噪声和杂散光。国内外很多HPLC的生产厂商不给出HPLC的线性动态范围。作者认为不给线性动态范围是不对的，因为不给线性动态范围，就意味着不知道这台HPLC分析的样品浓度的上限和下限。综上所述，HPLC的线性动态范围非常重要，它将限制仪器的使用范围（即限制仪器的适用性）。很遗憾的是许多科技工作者目前还未对线性动态范围引起重视。

3)线性动态范围测试方法

HPLC的线性动态范围的测试方法有多种。我国的计量检定规程JJG705-2002规定：波长254nm时，采用“丙酮/2%异丙醇水溶液（丙酮含量为0.1%、0.2%、….1.0%）冲洗检测池，并记下各溶液对应的稳定记录仪读数；由CH/CL算出检测器的线性范围（CH浓度上限、CL浓度下限）。”作者认为这种方法很不妥。因为浓度的下限是计算出来的，不是真正测试出来的下限。采用的计算公式为：CL=2NCV/H×20（公式本身有错误）；并且算出的下限值达到千万分之三点一（即：0.000031%）。这样的数据有什么意义？作者认为这种测试线性范围的测试方法既不符合仪器学理论，又不与国际接轨，有关部门应该尽快更正。

目前，国际上对线性动态范围的测试方法，一般是配置不同浓度的标准样品（以数量级递增），直接在仪器上测试其吸光度。求出偏离比耳定律1%时的蕞大吸光度Amax和蕞小吸光度Amin。二者相除即是仪器的线性动态范围LDR（Linine Dinamic Rangi）。即LDR=Amax/Amin。其具体操作是：HPLC仪器设置纵坐标为吸光度A，横坐标为浓度C；检测器的光谱带宽为2nm；波长设置可以在紫外区（如要求很高时可设置在253.7nm），也可在可见区（如500nm）；试样可任选，浓度从小到大，依次对所配试样进行测试。作曲线，从曲线上找出偏离线性在1%以内的范围。此范围内的Amax/Amin就是线性动态范围。

作者在研发HPLC的UV/FLD时，就是根据仪器学理论，从线性动态范围的物理概念出发，自己配置蒽不同浓度的溶液，以数量级递增，测出能保证1%相对误差的下限点和上限点，二者相除，得出其线性动态范围，效果非常好。

三、希望和建议

1、希望广大HPLC使用者打破崇洋媚外的思想，大胆使用能满足使用要求的国产仪器。

我国对各类HPLC年需求量达10000台以上。中国有20多家制造商生产HPLC，但是只占市场的20%左右，而国外占领中国市场80%左右。UHPLC仪器2013年我国进口1000台，每台10万美元，只是这一个产品，我国一年总共花掉1亿美元进口。实际上，我国上海伍丰公司、福建福立公司等都能生产UHPLC，质量都能满足使用要求，性价比大大优于进口产品，并且出口美国等发达国家。但是国人就是要花大价钱去买进口UHPLC，实在是令人费解。

国产HPLC多次招标中战胜国外品牌的例子很多，例如：对三聚氰胺建立国标时，在国标中采用哪种HPLC仪器，招标过程中，在难以取舍的情况下，采用比对测试方法，结果国产HPLC仪器一举战胜国外公司的产品。专家们根据比对检测数据的准确性、仪器的性价比等评价仪器的标准，一致通过采用北京普析通用公司的L6（目前升级为L600），国产HPLC打败了两家进口HPLC仪器，成为我国三聚氰胺国家标准中推荐的唯一国产HPLC仪器。

作者认为，我们中国的科技工作者要从民族高度看国产仪器和进口仪器。要大胆使用能满足使用要求的国产仪器（但是有极少数仪器离真正能满足使用要求还有差距，使用者在购买HPLC时应该高度重视之）。我们千万不能盲目迷信外国产品。当然盲目排外也是不对的，目前我国还不能生产的仪器，特别是有些高端HPLC，我们还是应该进口，并且一定要消化、吸收，为我所用。

2、建议广大科技工作者努力学习、不断提高自己的专业技术水平。

认真吸取前人的经验教训，认真参考有关文献，不断提高HPLC仪器制造和使用水平，为赶超国际先进水平努力奋斗。建议大家认真参考下述文献：

(1)李昌厚著，高效液相色谱仪器及其应用，北京：科学出版社，2014

(2)李昌厚著，仪器学理论与实践，北京：科学出版社，2008

(3)李昌厚著，紫外可见分光光度计仪器及其应用，北京：化学工业出版社，2010

(4)高效液相色谱（HPLC）仪器及其最新进展和有关问题（仪器信息网专题论坛）

致谢：本文写作过程中，参阅了北京大学药学院韩南银教授、浙江大学郭伟强教授的有关学术报告，作者在此一并致谢。科助仪器根据网络转载亦有删减，如有不妥请联系本公，谅解。